بررسی اثر کاهش بیان grp78 در سلول های اپی تلیالی رنگدانه دار شبکیه (rpe) و تاثیر آن بر روی بیان فاکتورهای التهابی

مقدمه: شبکه آندوپلاسمی به واسطه وجود چاپرون هایی نظیر grp78 نقش مهمی در بلوغ و تاخوردگی پروتئینها بازی میکند. تجمع پروتئین های تا نخورده در شبکه آندوپلاسمی منجر به فرایند استرس شبکه آندوپلاسمی میشود که پاسخ به این فرایند با کاهش کلی سنتز پروتئین و افزایش بیان چاپرون هایی نظیر grp78 همراه میباشد. در سلولهای رنگدانه دار شبکیه چشم افراد بالغ طولانی شدن فرایند er stress باعث مرگ برنامه ریزی شده این سلولهاو آسیب های شبکیه و بنابراین بیماری های شبکیه نظیر amdو rp میشود. هدف از این مطالعه بررسی کاهش بیان grp78 در سلولهای rpe و اثر آن برروی برخی از فاکتورهای مهم التهابی ونیز اثر آن برروی آپوپتوز و تکثیر سلولی بود. متد سلولهای rpe از کره های چشم افراد بالغ جدا شد وسلول های rpe جدا شده در محیط dmem/f12 حاوی 20 درصد fbs کشت داده شد و سپس در محیط dmem/f12 حاوی 10 درصد fbs زیرکشت های سلولی بعدی انجام شد. هویت آنها به وسیله ی مارکرهای اختصاصی rpe65 و سیتوکراتین 18/8 اثبات شد. در آزمایشات بعدی کشت های سلولی بین پاساژهای 2-7 توسط sirna مخصوص grp78 مورد تیمار قرار گرفتند. سلولهای تیمار شده با sc sirna ، transfection reagent و سلولهای rpe بدون تیمار به عنوان کنترل های آزمایش مورد بررسی قرار گرفتند. نتایج real time pcr کاهش قابل ملاحظه ای دربیان grp78 نشان داد. بیان caspase4 کاهش یافته و بیان crp افزایش یافته بود. مقدار رونوشت های mcp1، cfh، c5، c3، cd59و cd55بدون تغییر باقی مانده بود. تیمارهای rnai هیچ اثر ناخواسته ایی برروی مرگ برنامه ریزی شده و تکثیر سلولی در سلولهای ترانسفکت شده در مقایسه با کنترلها نداشت. بحث براساس مشاهدات به نظر میرسد که مقدار رونوشت caspase4 در ارتباط نزدیک با بیان grp78 میباشد و از آنجایی که caspase4 به عنوان یکی از عوامل مهم در آپوپتوز شناخته شده است میتوان نتیجه گرفت که کاهش grp78 میتواند مانع از آپوپتوزدر سلول های تیمار شده گردد.از طرف دیگر مقدار افزایش یافته ی crp پاسخ های ضد التهابی را تقویت میکند. نتایج این تحقیق نشان داد از آنجا که در بیماری amdعلت اصلی آسیب به سلول های فتورسپتوری التهاب و تخریب سلولهای rpe می باشد کنترل بیان grp78می تواند اثرات مطلوبی در کنترل پیشرفت و توسعه ی بیماری داشته باشد. واژه های کلیدی : سلولهای rpe، استرس شبکه آندوپلاسمی، grp78، sirna، فاکتورهای التهابی، آپوپتوز،تکثیر سلولی